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多肽分解中二硫键成环的条件决议及成环思绪

作者:andy       公布>###nbsp;     

一、二硫键反响条件选取

二硫键便是指卵白质或多肽分子布局中两个差别位点Cys的巯基(-SH)被氧化所发生的S-S共价键。一条多肽链上纷歧样的地位的氨基酸两头所发生的二硫键,可以把多肽链折叠成特定的空间散布。多肽分子一样平常来说分子量很大,空间散布繁琐,布局中发生二硫键时必要两个半胱氨酸在空间间隔上十分靠近。别的,多肽布局中复原态的巯基化学特征活泼,很容易呈现别的的反作用[fǎn zuò yòng],同时肽链上其他侧链也大概会呈现很多修饰,以是,多肽链接纳修饰所选择的氧化剂和氧化条件是反响的紧张要素,反响原理也较为庞大,既有大概是自在基反响,也有大概是离子反响。

多肽链间的二硫键

反响条件有很多种选择,比方氛围氧化,DMSO氧化等平和的氧化历程,或H2O2I2,汞盐等猛烈的反响条件。

1、氛围氧化法:

氛围氧化法天生二硫键是多肽分解中最具代表性的措施,一样平常是将巯基处在复原态的多肽消融于水里,在近中性或弱碱性情况下(PH6.5-10),反响24个小时以上。为了低落分子互相间二硫键发生的大概性,这种办法每每必要在较低浓度的情况下完成。

2、碘氧化法:

将多肽消融于25%的甲醇水溶液或30%的醋酸水溶液中,逐滴滴加10-15mol/L的碘来举行氧化,反响15-40min。当多肽链内里含有对碘分外敏感的TyrTrpMetHis的残基时,氧化条件要十分精准,氧化完成后,立刻参加维生素C或硫代硫酸钠扫除过多的碘。

二、两对及多对二硫键成环对策

当序列中含有两对或多对二硫键想要成环时,一样平常会有天然随机成环和定点成环两种状况:

1、天然随机成环指序列当中的Cys互相间随意成环,与一对二硫键成环条件差未几;

2、定点成环指序列当中的Cys依据设计要求发生二硫键,反响历程绝对来说比力庞大。在固相分解多肽前,需提早订定几对二硫键天生的次序和办法路经,选择合适的侧链巯基掩护基,依附其特征的差别,渐渐氧化天生两对或多对二硫键。一样平常接纳的巯基掩护基有trt,Acm,Mmt,tBu,Bzl,Mob,Tmob等基团。

绝对于二对及多对二硫键成环的多肽,在订定好二硫键天生序次及Cys侧链掩护对策后,关于每一对二硫键成环后,都市取少局部树脂切割,而且对切割后产品实行MS查验。

 

写到最初:

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